مولد الكيموتربسين بروإنزيم محلل للبروتين مكوّن من سلسلة واحدة بطول ٢٤٥ حمضًا أمينيًا، يُنتَج في خلايا العُنيبة البنكرياسية ويُخزَّن في حبيبات قبل الإفراز إلى القناة المؤدية إلى الإثني عشر؛ يبقى خاملاً ثم يُنشَّط بالتربسين إلى π-كيموتربسين الذي يتحول لاحقًا إلى α-كيموتربسين النشط.